酸奶益生菌活菌數檢測

益生菌是酸奶產品的核心價值所在，其中雙歧桿菌作為最主要的益生菌菌株之一，其活菌數量直接關系到產品的保健功能和品質。國家標準明確規定，酸奶中雙歧桿菌huo菌數需達到 ≥1×10? CFU/g(GB 4789.35-2016)。這一指標不僅是衡量產品是否符合市場準入的硬性要求，更是保障消費者健康權益的關鍵。

2024年中國乳制品工業協會數據顯示，市場上30%的低溫酸奶存在益生菌活菌數不達標問題，部分產品在保質期內活菌數衰減率超過70%?；罹鷶挡蛔悴粌H導致產品失去調節腸道菌群的作用，還可能因微生物失衡引發食品安全風險。因此，建立科學的檢測方法并嚴格執行，是酸奶生產企業質量控制的核心環節。

平板計數法檢測原理

酸奶益生菌活菌數檢測采用 平板計數法(GB 4789.35-2016)，其原理是將酸奶樣品進行梯度稀釋后，通過傾注培養使活菌在固體培養基上形成肉眼可見的菌落，從而實現活菌數量的定量計數。具體過程如下：

梯度稀釋：將樣品通過無菌操作逐級稀釋至合適濃度，確保每個培養皿中形成30-300個可計數菌落

傾注培養：將稀釋液與融化的MRS培養基混合，冷卻后形成固體平板

厭氧培養：雙歧桿菌為嚴格厭氧菌，需在36±1℃厭氧條件下培養48-72小時

菌落計數：統計平板上的特征菌落(圓形、邊緣整齊、乳白色凸起)，按公式計算活菌數

這種方法的優勢在于 直觀可靠，可直接觀察菌落形態并計數活菌，檢出限可達10 CFU/g，是國ji公ren的微生物計數金標準。

檢測標準與方法依據

嚴格遵循 GB 4789.35-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 雙歧桿菌檢驗》，標準對檢測流程的關鍵環節做出明確規定：

培養基：采用MRS培養基(含乙酸鈉和半胱an酸鹽酸鹽)，抑制雜菌生長

稀釋液：磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 7.0)或生理鹽水

培養條件：36±1℃，厭氧培養(需使用厭氧培養箱或厭氧袋)

計數范圍：選擇菌落數在30-300 CFU的平板進行計數

結果計算：

X = (N × V?) / (m × V?)

其中：

X：樣品中雙歧桿菌huo菌數(CFU/g)

N：平板菌落數

V?：稀釋液總體積(mL)

V?：接種體積(mL)

m：樣品質量(g)

標準同時要求做 空白對照 和 平行實驗(每個稀釋度做2個平行樣)，相對偏差需≤10%。

平板計數法檢測步驟

樣品前處理

樣品稀釋

無菌操作稱取25 g酸奶樣品至225 mL稀釋液中，制成1:10勻漿液

用1 mL移液槍吸取1 mL勻漿液至9 mL稀釋液，依次稀釋至10??~10??濃度梯度

每個稀釋度更換無菌移液槍頭，充分混勻

傾注培養

選擇2-3個適宜稀釋度，各吸取1 mL稀釋液注入無菌培養皿

倒入45-50℃的MRS培養基約15 mL，輕輕旋轉混勻

待培養基凝固后倒置，放入厭氧培養箱(85% N?、10% H?、5% CO?)

培養與計數

培養條件

36±1℃培養48±2小時，觀察菌落生長情況

若菌落數量不足，可延長培養至72小時

菌落計數

雙歧桿菌典型菌落特征：圓形、邊緣整齊、表面光滑、乳白色、直徑1-3 mm

選取菌落數30-300的平板，按公式計算活菌數

低于30 CFU記為“<30 CFU/g"，高于300 CFU記為“>300 CFU/g"

結果報告

當只有一個稀釋度平板菌落數在30-300時，直接按該稀釋度計算

兩個連續稀釋度均在計數范圍內時，按 比值≤2的稀釋度計算平均值

結果保留兩位有效數字，單位以CFU/g表示

限liang要求與質量控制要點

國家標準限liang要求

根據GB 4789.35-2016及相關產品標準：

發酵乳(含雙歧桿菌)：出廠時≥1×10? CFU/g，保質期內≥1×10? CFU/g

益生菌發酵乳：額外添加益生菌的產品，活菌數需符合標簽明示值(通?！?×10? CFU/g)

2023年市場監管總局抽檢數據顯示，合規企業產品雙歧桿菌huo菌數普遍在1×10?~1×10? CFU/g，而小品牌產品合格率僅68%，主要問題為 冷鏈運輸不當 和 生產過程污染。

關鍵質量控制環節

樣品采集與運輸

全程冷鏈(2-8℃)，采樣后2小時內送達實驗室

使用無菌采樣袋，避免反復凍融

實驗室操作

超凈工作臺紫外消毒30分鐘，操作人員需無菌操作

稀釋液和培養基需無菌驗證(36℃培養48小時無雜菌生長)

計數準確性保障

定期校準移液槍(誤差≤2%)

使用標準菌株(如雙歧桿菌ATCC 29521)做陽性對照

菌落形態不確定時，可進行革蘭氏染色(雙歧桿菌為革蘭氏陽性桿菌，無芽孢)

檢測意義與行業應用

不僅是 產品質量控制 的必要手段，更是 行業健康發展 的技術支撐：

消費者權益保障：確保產品標注的“益生菌含量"真實可信，避免虛假宣傳

生產工藝優化：幫助企業監控發酵過程，優化菌種配比和發酵參數

冷鏈物流驗證：通過不同溫度條件下的活菌數變化，評估運輸鏈的穩定性

科研創新支持：為新型益生菌產品開發提供微生物學數據

隨著益生菌健康理念的普及，2024年中國功能性酸奶市場規模已達680億元，活菌數檢測將在推動行業標準化、規范化發展中發揮越來越重要的作用。

通過嚴格執行平板計數法，企業可有效管控產品質量風險，消費者也能更科學地選擇真正具有保健價值的酸奶產品。建立從生產到檢測的全鏈條質量控制體系，是酸奶行業實現高質量發展的必由之路。